Diferența dintre RT PCR și QPCR | RT PCR vs QPCR

Diferența cheie - PCR RT vs QPCR

Reacția lanțului de polimerază este o tehnică utilizată pentru a amplifica o regiune specifică a ADN in vitro. Datorită invenției acestei tehnici de către Kary Mullis în 1983, oamenii de știință au posibilitatea de a face mii până la milioane de copii ale fragmentelor ADN specifice în scopuri de cercetare. În prezent, aceasta a devenit o tehnică obișnuită și obișnuită efectuată în laboratoarele clinice și de cercetare pentru o gamă largă de aplicații. Există variații ale tehnicii PCR tradiționale, cum ar fi RT PCR, PCR nested, PCR multiplex, Q PCR, RT - QPCR, etc. RT PCR și Q PCR sunt două variații importante ale PCR. Diferența cheie dintre RT PCR și Q PCR este că RT PCR este utilizat pentru a detecta exprimarea genei prin crearea de transcripte ADN complementar (cADN) din ARN în timp ce pentru măsurarea cantitativă a produselor PCR în timp real folosind coloranți fluorescenți.

CUPRINS> 1. Prezentare generală și diferență cheie

2. Ce este RT PCR

3. Ce este QPCR

4. Comparație de la o parte la alta - RT PCR vs QPCR

5. Rezumat

Ce este RT PCR?

Reacția în lanț a polimerazei inverse de transcriere (RT PCR) este o variantă a PCR care este utilizată pentru a detecta exprimarea ARN. Este o metodă foarte importantă pentru detectarea expresiei mRNA în țesuturi. Se utilizează RT PCR atunci când materia primă a probei este ARN. În RT PCR, mARN-ul șablonului este mai întâi transformat în ADN complementar. Această etapă este catalizată de enzima transcriptază reversă și procesul este cunoscut ca transcripția inversă. În al doilea rând, se utilizează PCR tradițional pentru ADNc nou sintetizat pentru amplificare.

RT PCR este o tehnică extrem de sensibilă care necesită o cantitate relativ mică de probe de ARN. RT PCR este utilizat în mod obișnuit în diagnosticarea și cuantificarea speciilor de ARN, în special a virusurilor ARN cum ar fi virusul imunodeficienței umane și virusul hepatitei C.

Figura 01: tehnica RT PCR

Ce este QPCR?

PCR cantitativ (QPCR) este o variantă a PCR care este utilizată pentru măsurarea cantitativă a produselor PCR. Este, de asemenea, cunoscut ca reacție în lanț în timp real a polimerazei, deoarece măsoară amplificarea timpului real folosind mașină PCR în timp real. Este o metodă adecvată pentru determinarea cantității unei secvențe țintă sau a unei gene prezente într-o probă. Trăsătura interesantă a QPCR este aceea că combină amplificarea și cuantificarea adevărată într-un singur pas. Prin urmare, nevoia de electroforeză în gel în detectare poate fi eliminată prin tehnica QPCR. QPCR utilizează coloranți fluorescenți pentru a marca produsele PCR în timpul reacțiilor PCR, ceea ce duce în cele din urmă la o cuantificare directă.Atunci când se acumulează produsele PCR, semnalele fluorescente sunt de asemenea acumulate și vor fi măsurate prin intermediul mașinii în timp real. QPCR poate fi combinat cu RT PCR. Este cunoscut ca RT - QPCR sau QRT - PCR și este considerat ca fiind metoda cea mai puternică, sensibilă și cantitativă pentru detectarea nivelurilor de ARN în celule sau țesuturi.

SYBR Green și Taqman sunt două metode utilizate pentru detectarea sau urmărirea procesului de amplificare a PCR în timp real. Metoda SYBR Green se efectuează folosind un colorant fluorescent denumit SYBR verde și detectează amplificarea prin legarea colorantului pentru a produce ADN dublu catenar. Taqman se efectuează utilizând sonde dublu marcate și detectează amplificarea prin degradarea sondei prin polimerază Taq și eliberări ale fluoroforului așa cum se arată în figura 02. Ambele metode monitorizează progresul procesului de amplificare și raportează cantitatea produsului în timp real.

PCR în timp real are o mare varietate de aplicații, cum ar fi cuantificarea expresiei genelor, analiza micro ARN și non-codarea ARN, genotiparea SNP, detectarea variantelor de copii, detectarea mutațiilor rare, detectarea organismelor modificate genetic, detectarea agenților infecțioși etc..

Figura 02: Tehnica cantitativă PCR

Care este diferența dintre RT PCR și QPCR?

- diff Articol Mijloc înainte de masă ->

RT PCR vs QPCR

RT PCR este o tehnică utilizată pentru a detecta exprimarea genei prin amplificare.

QPCR este o tehnică care amplifică ADN-ul și cuantifică produsele PCR în timp real.
Implicarea enzimei revers transcriptază	Transcriptaza reversă enzimatică este utilizată pentru RT PCR.
Transcriptaza reversă enzimatică nu este utilizată pentru QPCR.
Utilizarea moleculelor marcate cu fluorescență	Coloranții sau sondele marcate fluorescente nu sunt utilizate pentru RT PCR.
Pentru QPCR se utilizează coloranți sau sonde marcate fluorescente.
Cuantificarea produsului PCR	Cu excepția cazului în care este cuplată cu QPCR, RT PCR nu cuantifică produsul PCR.
QPCR măsoară cantitativ produsul PCR.
Material inițial	Materia primă este mRNA.
Materia primă este ADN.
Sinteza cADN	ADN-ul complementar este produs în timpul PCR RT.
ADN-ul complementar nu este produs în timpul QPCR.
Rezumat - RT PCR vs QPCR	RT PCR și QPCR sunt două versiuni ale PCR tradiționale. Tehnica RT PCR este efectuată pentru probe de mRNA și este condusă prin transcriere inversă și producerea ADNc. QPCR este utilizat pentru a cuantifica produsele PCR în timpul ciclurilor termice PCR în timp real utilizând coloranți fluorescenți sau sonde etichetate. În QPCR, cantitatea de produs PCR este reprezentată de semnalele fluorescente emise de eșantion. RT PCR este utilizat în mod obișnuit ca un proces de amplificare, în timp ce QPCR este utilizat în mod obișnuit ca proces de cuantificare. Aceasta este diferența dintre RT PCR și QPCR.

Referințe:

1. Deepak, SA, KR Kottapalli, R. Rakwal, G. Oros, KS Rangappa, H. Iwahashi, Y. Masuo și GK Agrawal. "Real-Time PCR: Revoluționarea analizei de detecție și expresie a genelor. "Genomica curentă.Bentham Science Publishers Ltd., iunie 2007. Web. 03 aprilie 2017

2. Zeka, Fjoralba, Katrien Vanderheyden, Els De Smet, Claude A. Cuvelier, Pieter Mestdagh și Jo Vandesompele. "Analiza expresiei genei bazată pe RT-qPCR pe o bază directă și sensibilă a probelor FFPE. "Nature News. Nature Publishing Group, 22 februarie 2016. Web. 03 aprilie 2017

3. Overbergh, L., A. Giulietti, D. Valckx, B. Decallonne, R. Bouillon și C. Mathieu. "Utilizarea PCR în timp real de transcriptază pentru cuantificarea expresiei genei citokinice. "Jurnalul tehnicilor biomoleculare: JBT. Asociația Resurselor Biomoleculare, Mar. 2003. Web. 03 aprilie 2017

Amabilitatea imaginii:

1. "Taqman" De Utilizator: Braindamaged - Muncă proprie a Uploaderului inițial (Domeniul Public) prin Wikimedia

2. "Reacția în lanț a polimerazei inverse de transcriere" Prin Jpark623 - Activitate proprie (CC BY-SA 3. 0) prin Wikimedia